ICS 13.300;11.100 A 80 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T29763—2013 化学品 稀有鲫急性毒性试验 ChemicalsRare Minnow (Gobiocypris rarus) acute toxicity test 2013-09-18 发布 2014-03-20实施 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T29763—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由全国危险化学品管理标准化技术委员会（SAC/TC251）提出并归口。 本标准起草单位：上海市检测中心、环境保护部化学品登记中心、中国科学院水生生物研究所、中国 检验检疫科学研究院、环境保护部南京环境科学研究所、沈阳化工研究院有限公司安全评价中心。 本标准主要起草人：殷浩文、张京估、赵华清、沈英娃、刘纯新、聂晶磊、王剑伟、陈会明、李晞、石利利、 刘济宁、干蕾、蔡磊明、赵玉艳、 I GB/T29763—2013 化学品稀有鲫急性毒性试验 1范围 本标准规定了稀有鲫化学品急性毒性试验的方法，包括静态试验、半静态试验和流水式试验三种 方式，受试物所需信息、原理、设备与材料、试验系统、试验程序、质量控制和结果报告。 本标准适用于测试稀有鲫的化学品急性毒性。 规范性引用文件 2 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T27861化学品鱼类急性毒性试验 3 术语和定义 GB/T27861界定的术语和定义适用于本文件。 受试物所需信息 4 受试物所需信息包括： a) 水中溶解度； b) 蒸气压； c) 结构式； d) 纯度； e) 在水中和光照条件下的稳定性； f) pKa值; g) 水溶液中的定量分析方法； h) 正辛醇-水的分配系数（Pow）； i) 快速生物降解试验结果。 5 原理 5.1用于测定受试物短期暴露对稀有鲫可能产生的影响，以评价受试物的短期毒性。 5.2将稀有鲫暴露于含不同浓度受试物的水溶液，以96h为试验周期，在24h、48h、72h和96h时 记录受试鱼的死亡率，确定50%稀有鲫死亡时的受试物浓度，用LC50表示。 6 设备与材料 6.1仪器设备 仪器设备包括： 1 GB/T297632013 a) 溶解氧测定仪（1%）； b) 水硬度计（1mg/L）； c) 温度控制系统（0.1℃)； d) pH计(0.1 pH); e) 分析天平（0.0001g）； f) 惰性材料制成的水族箱或水槽1，规格一致，体积适宜； g) 适用于流水式的连续分配和稀释系统（如，计量泵、稀释仪等）。 6.2 材料与试剂 标准稀释水用到的试剂包括： a） 氯化钙； b）硫酸镁； 碳酸氢钠； d）氯化钾。 所有试剂应是分析纯，用电导率小于或等于10uS/cm的蒸馏水或去离子水配制。 7 试验系统 7.1试验方式的选择 7.1.1在试验之前，应根据受试物在水中的化学稳定性确定合适的试验方式，从而选定需用的容器和 装置2。 7.1.2试验期间，受试物在水溶液中的浓度维持在初始实测浓度的土20%内，可采用静态试验方式。 当水溶液中受试物不稳定时，即浓度变化超过士20%时，应采用半静态试验方式或流水式试验系统以维 持受试物的浓度。 7.2稀有鲫 7.2.1选择 试验鱼种为稀有鲫（Gobiocyprisrarus），全长范围为30mm士10mm。应在养鱼场和实验室条 件（pH为6.0～8.5；温度为21℃～25℃；光照为每天12h～16h；溶解氧浓度不低于空气饱和值的 80%）下化和饲养。应保证一次试验用鱼为同一批号规格一致、来源可靠、健康且无明显的畸形 7.2.2暂养和驯养 7.2.2.1稀有鲫用于试验之前，应在实验室至少暂养12d。暂养条件可与驯养条件一致。 7. 2. 2. 2 临试验前，应在符合下列条件的环境中至少驯养7d。 水：与试验用水水质相同； a） b) 光照：每天12h16h； c) 温度：21℃~25℃； d) 溶解氧浓度：不低于空气饱和值的80%； e) 喂养：每周3次或每天投食，至试验开始前24h为止。 1) 根据样品理化特性，选择材料合适的试验容器。如，玻璃等。 2） 根据试验方式和负荷量进行选择。 2 GB/T29763—2013 7.2.2.3驯养开始48h后，记录死亡率，并按下列条件处理： a）7d内死亡率小于5%，可用于试验。 b）7d内死亡率在5%～10%之间，继续驯养7d，如果死亡不再发生，该批试验鱼可用于试验， c）7d内死亡率大于10%，舍弃整组鱼。 7.3试验用水 应用标准稀释水（参见附录A）、曝气除氯的自来水或高质量的天然水。水的总硬度为10mg/L～ 250 mg/L(以CaCO3计),pH为6.0~8.5。 7.4受试物的制备 7.4.1将受试物溶解于试验用水中配制成受试物贮备液，通过稀释贮备液配制成一定浓度的试验 溶液。 7.4.2难溶物质的贮备液可以通过超声分散或其他适合的物理方法配制，必要时可以使用对鱼毒性低 的有机溶剂、乳化剂和分散剂。使用这些物质时应加设溶剂对照试验组，且所有试验容器中的溶剂浓度 应相同，并不应超过100mg/L或100μL/L。 7.4.3应在加人前调节受试物贮备液的pH，使其接近试验用水的pH。调节贮备液的pH时不应使受 试物浓度明显改变，不应发生化学反应或沉淀。宜使用HCI和NaOH来调节。 7.4.4如果加人受试物后水的pH有明显变化（超出6.08.5），则重新配制试验溶液。 8试验程序 8.1暴露条件 a） 持续时间：96h。 b）承载量：静态和半静态试验系统每升水中鱼的总湿重不超过1.0g，流水式试验系统承载量可 适当提高。 c光照：每天12h~16h。 d) 温度：21℃～25℃且试验期间温度变化不超过2℃。 e) 溶解氧浓度：不应低于空气饱和值的60%。曝气时不应使受试物浓度明显变化 f) 喂食：禁食。 g）干扰：避免可能影响鱼行为的干扰。 8.2预试验 8.2.1用以确定正式试验所需浓度范围，可选择较大范围的浓度系列，如1000mg/L、100mg/L、 10mg/L、1mg/L0.1mg/L。每个浓度组放入的稀有鲫不少于3尾，不设平行组。试验时间为96h。 每日记录各容器内的死鱼数，并及时取出死鱼。 8.2.2如果一次预试验结果无法确定正式试验所需的浓度范围，应调整浓度范围再次进行预试验。 8.3正式试验 8.3.1根据预试验，在包括使稀有鲫全部死亡的最低浓度和96h稀有鲫全部存活的最高浓度之 间至少应设置5个浓度组，并以儿何级数3排布。浓度间隔系数应小于或等于2.2。同时设一个空白对 应至少使用7尾稀有鲫。 3）即等比数列。 3