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ICS 11.020 SN C 62 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5098—2019 国境口岸人冠状病毒NL63和HKU1 实时荧光RT-PCR检测方法 Detection method for human coronavirus NL63 and human coronavirus HKU1by fluorescence RT-PCR at frontier ports 2019-09-03发布 2020-03-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T5098—2019 前言 本标准根据GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位:中华人民共和国深圳海关、深圳市检验检疫科学研究院、中华人民共和国成都海 关,中国检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人:刘胜牙、朱玉兰、石莹、胡孔新、谢聪贤、徐云庆、张树平、董瑞玲、李东晓、刘君、 业标准信息服务平台 SN/T 5098—2019 国境口岸人冠状病毒NL63和HKU1 实时荧光RT-PCR检测方法 1范围 本标准规定了国境口岸人出境人员携带人冠状病毒NL63和HKU1的实时荧光RT-PCR检测方 法,包括标本的采集、运输、保存和处理,检测、结果判定和报告。 方法。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件 GB19489实验室生物安全通用要求 WS/T230临床诊断中聚合酶链反应(PCR)技术的应用 WS233微生物和生物医学实验室生物安全通用准则 中华人民共和国卫生部令第45号可感染人类的高致病性病原微生物菌(毒)种或样本运输管理 规定 人间传染的病原微生物菌(毒)种保藏机构管理办法 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 人冠状病毒NL63humancoronavirusNL63,HCoV-NL63 属于冠状病毒科冠状病毒属α类冠状病毒。HCoV-NIL63在形态上与其它冠状病毒属的病毒 致,颗粒呈球形,直径在120~160nm。HCoV-NL63属于单股正链RNA病毒,其基因组有27.533个 核苷酸;基因组5端2/3的区域由开放读码框组成编码复制酶多集蛋白,其3端的1/3区域编码表面纤 突蛋白、膜蛋白、小膜蛋白及核衣壳蛋白四个结构蛋白;其各基因排列为5-1a-1b-S-ORF3-E-M-N-3°。 3.2 人冠状病毒HKU1humancoronavirusHKU1,HCoV-HKU1 属于冠状病毒科冠状病毒属β类冠状病毒。HCoV-NL63在形态上与其它冠状病毒属的病毒 致,颗粒呈球形,直径在120~160nm。HCoV-HKU1属于单股正链RNA病毒,其基因组有29,926个 区域编码血凝素-酯酶蛋白(HE)及表面纤突蛋白、膜蛋白、小膜蛋白和核衣壳蛋白四个结构蛋白;其各 基因排列为5'-1a-1b-HE-S-E-M-N-3。 4缩略语 下列缩略语适用于本文件。 1 SN/T 5098—2019 FAM6-羧基荧光素(6-carboxy-fluorescein) HEX六氯-6-甲基荧光素(Hexachlorofluorescein)) 5 生物安全要求 生物安全要求包括: 个人防护遵循GB19489; 实验室遵循GB19489和WS233对生物安全2级(BSL-2)实验室的生物安全要求; 实验中产生的废弃物品遵照GB19489对废弃物的处理要求进行无害化处理; 疑似人感染HCoV-NL63和HCoV-HKU1病毒的材料的包装及转运应符合中华人民共和国 卫生部第45号令; PCR防污染措施按WS/T230的规定执行。 6 实验仪器设备 设备包括: 实时荧光定量PCR仪; 超净工作台; 生物安全柜; 高压灭菌锅; 低温高速离心机:最大离心力200 漩涡振荡器; 标准信 恒温水浴锅。 实验试剂 以正 除另有规定外,所有试剂均采用分析纯。本方法使用的主要试剂如下: 标本保存液:在新鲜配制的190mLEagle'sMEM中加人56C热火活30min的胎牛血清 4mL、2mL庆大霉素(5000μg/mL)、2mL两性霉素B(250μg/mL)和2mL青链霉素(青霉 素G10000U/mL、链霉素10000μg/mL),用7.5%碳酸氢钠溶液调至pH7.2 核酸提取试剂:用德国Qiagen公司QIAampViralRNAKit提取病毒核酸!; 实时荧光RT-PCR试剂:TAKARA公司OnesteprealtimeRT-PCRkit?"; 无RNA酶的DEPC水; 引物和探针序列见表1。 1)和2)由指定单位提供,给出这一信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可。如果其他等效产 品具有相同的效果,则可使用这些等效产品。 2
SN-T 5098-2019 国境口岸人冠状病毒NL63和HKU1实时荧光RT-PCR检测方法
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