ICS 65.100 CCS B 21 34 安徽省地方标准 DB34/T 4314 —2022 植物源性农产品中氟虫腈及其代谢物残留 量的测定 液相色谱-质谱联用法 Determination of fipronil and its metabolite residues in agri cultural products of plant origin —Liquid chromatography ta ndem mass spectrometry method 2022 - 10 - 26 发布 2022 - 11 - 26 实施 安徽省市场监督管理局 发布 DB34/T 4314 —2022 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所提出。 本文件由安徽省农业农村厅归口。 本文件起草单位：安徽省农业科学院植物保护与农产品质量安全研究所、农业农村部农产品质量安 全风险评估实验室（合肥）、安徽省食品药品检验研究院、阜阳市农业综合行政执法监督支队、安庆市农产品质量安全检测中心、宣城市农产品质量安全中心、寿县农业技术推广中心、宿松县植检植保站。 本文件主要起草人：褚玥、刘琴芳、黄泾、李军、王伟、李金宝、余兵、王莹、孙明娜、董旭、童 舟、孟丹丹、王梅、段劲生、高同春。 DB34/T 4314 —2022 1 植物源性农产品中氟虫腈及其代谢物残留 量的测定 液相色谱-质 谱联用法 1 范围 本文件规定了植物源性农产品小麦、大米、菠菜、花生、甘蓝、柑橘中氟虫腈及其代谢物氟甲腈、 氟虫腈砜、氟虫腈硫醚残留量的液相色谱质谱联用检测方法。 本文件适用于植物源性农产品小麦、大米、菠菜、花生、甘蓝、柑橘中氟虫腈及其代谢物氟甲腈、 氟虫腈砜、氟虫腈硫醚残留量的测定。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 2763-2021 食品安全国家标准 食品中农药最大残留限量 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中氟虫腈及其代谢物氟甲腈、氟虫腈砜、氟虫腈硫醚用乙腈和水混合溶液提取后，经吸附剂分 散固相萃取净化，液相色谱-质谱联用法检测，外标法定量。 5 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 GB/T 6682 规定的一级水。 试剂 5.1.1 乙腈（CH 3CN，CAS 号：75-05-8）：色谱纯。 5.1.2 甲醇（CH 3OH， CAS 号：67-56-1）：色谱纯 。 5.1.3 甲酸（HCOOH，CAS 号：64-18-6）：色谱纯。 5.1.4 乙酸铵(CH 3COONH 4，CAS 号：631-61-8)：色谱纯。 5.1.5 无水硫酸镁（MgSO4，CAS 号：7487-88-9）。 溶液配制 5.2.1 甲酸水溶液（0.1％）：吸取 1 mL 甲酸（5.1.3），加水混匀定容至 1 L。 DB34/T 4314 —2022 2 5.2.2 乙酸铵-甲酸水溶液 （5 mmol/L） ：称取0.388 g 乙酸铵 （5.1.4） ，用 0.1％甲酸水溶液 （5.2.1） 溶解并稀释至 1 L，摇匀。 标准品 —— 氟虫腈（C 12H4Cl2F6N4OS，CAS 号：120068-37-3） —— 氟甲腈（C 12H4Cl2F6N4，CAS 号：205650-65-3） —— 氟虫腈砜（C 12H4Cl2F6N4O2S，CAS 号：120068-36-2） —— 氟虫腈硫醚（C 12H4Cl2F6N4S，CAS 号：120067-83-6）标准品，纯度均 ≥99.0％ 标准溶液配制 5.4.1 氟虫腈标准储备溶液（1 000 mg/L）：准确称取氟虫腈标准品 10 mg（精确至 0.1 mg），用甲 醇（5.1.2）溶解，定容至 10 mL，－18℃下避光保存，有效期 6 个月。 5.4.2 氟甲腈标准储备溶液（1 000 mg/L）：准确称取氟甲腈标准品 10 mg（精确至 0.1 mg），用甲 醇（5.1.2）溶解，定容至 10 mL，－18℃下避光保存，有效期 6 个月。 5.4.3 氟虫腈砜标准储备溶液（1 000 mg/L）：准确称取氟虫腈砜标准品 10 mg（精确至 0.1 mg）， 用甲醇（5.1.2）溶解，定容至 10 mL，－18℃下避光保存，有效期 6 个月。 5.4.4 氟虫腈硫醚标准储备溶液 （1 000 mg/L） ：准确称取氟虫腈硫醚标准品 10 mg （精确至0.1 mg） ， 用甲醇（5.1.2）溶解，定容至 10 mL，－18℃下避光保存，有效期 6 个月。 5.4.5 混合标准储备溶液 （10 mg/L）：分别吸取适量的各单标储备液 （5.4.1， 5.4.2，5.4.3，5.4.4）， 用甲醇（5.1.2）溶解，配制成浓度为 10 mg/L的混合标准储备溶液，－18℃下避光保存，有效期 1 个月。 材料 5.5.1 十八烷基硅烷键合硅胶（C 18）：粒径 40 μm～60 μm。 5.5.2 微孔滤膜（有机相）：13 mm×0.22 μm，或相当者。 6 主要仪器和设备 液相色谱 -质谱联用仪：配有电喷雾离子源（ESI）。 分析天平：感量 0.01 g和 0.1 mg。 振荡器。 离心机：转速不低于 7000 r/min。 涡旋混合仪。 7 试样制备与储存 样品测定部位按照 GB 2763-2021 中附录A 的规定执行。取适量样品，依据试样制备规程，四分法 取样，制成试样，置于 －18℃条件下保存。 8 分析步骤 提取和净化 DB34/T 4314 —2022 3 准确称取待测试样 5 g（精确至 0.01 g），置于 50 m L 离心管中，加入 5 mL 水，10 mL 乙腈 （5.1.1），振荡 1 h，再加入 3 g 氯化钠，涡旋 1 min， 以 5 000 r/min 离心 5 min，取上清液 2 mL 置于10 mL 离心管中，加入 150 mg 无水硫酸镁和 50 mg C 18 吸附剂（5.5.1）净化，涡旋 1 min， 7 000 r/min 离心 5 min，取上清液过 0.22 μm 有机微孔滤膜（5.5.2）过滤，待测。 测定 8.2.1 液相色谱参考条件 如下： a) 色谱柱：C 18柱，50 mm × 2.1 mm（内径），粒径 1.7 μm，或相当者； b) 流动相：A 相为乙酸铵-甲酸水溶液（5.2.2），B 相为甲醇溶液（5.1.2）。流动相梯度条件见 表1； c) 流速：0.25 mL/min； d) 柱温：40℃； e) 进样体积： 5 μL。 表1 流动相及其梯度条件 梯度时间 /min 流动相比例 /（％） 流动相A 流动相B 0.0 95 5 1.0 60 40 3.0 20 80 5.0 95 5 6.0 95 5 8.2.2 质谱参考条件 如下： a) 离子源：电喷雾离子源（ESI）； b) 锥孔电压：4 V； c) 扫描方式：负离子扫描； d) 离子源温度：150℃； e) 脱溶剂管温度：600℃； f) 毛细管电压 0.5 KV，去溶剂气 1000 L/h（高纯氮，纯度≥99.999％），碰撞气 0.15 mL/min （氩气）； g) 检测方式：多反应监测 MRM，多反应监测条件见表 2. 表2 氟虫腈及其代谢物的的保留时间和多反应监测（MRM）质谱参数 化合物 保留时间 min ESI模式 定量离子对 m/z 定性离子对 m/z 碰撞能量 eV 氟虫腈 3.66 负离子 434.9/250.0 434.9/250.0 29 434.9/330.0 15   DB34/T 4314 —2022 4 表2（续） 化合物 保留时间 min ESI模式 定量离子对 m/z 定性离子对 m/z 碰撞能量 eV 氟甲腈 3.61 负离子 387.1/351.1 387.1/351.1 14 387.1/282.0 48 氟虫腈砜 3.79 负离子 451.1/281.9 451.1/281.9 32 451.1/415.1 24 氟虫腈硫醚 3.72 负离子 419.1/262.0 419.1/262.0 34 419.1/383.1 16 8.2.3 标准工作曲线 将氟虫腈及其代谢物的混合标准储备溶液（5.4.5），用空白基质提取溶液（8.1）逐级稀释，配制 成质量浓度分别为 0.005 mg/L、0.01 mg/L、0.05 m g/L、0.1 mg/L、0.2 mg/L 和 0.5 mg/L 的系列基 质匹配混合标准溶液，按质量浓度由低至高依次进样测定，以峰面积（扣除空白基质中的本底）为纵坐标，质量浓度为横坐标，绘制线性标准曲线，计算得到标准曲线回归方程和相关系数。 基质匹配混