ICS67.050 CCSB 0454 西 藏 自 治 区 地 方 标 准 DB54/T 0412—2024 青稞及其制品中花青素含量的测定 分光光度法 2024-09-15发布 2024-10-15实施 西藏自治区市场监督管理局  发 布 DB54/T 0412—2024 I前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由西藏自治区农业农村标准化技术委员会提出并归口。 本文件起草单位：西藏自治区农牧科学院农业质量标准与检测研究所、西藏自治区农畜产品工程技 术研究中心、拉萨海关技术中心、南阳理工学院。 本文件主要起草人：魏娜、代艳娜、刘青海、张唐伟、王军、曹晓钢、彭江。 DB54/T 0412—2024 1青稞及其制品中花青素含量的测定 分光光度法 1　范围 本文件规定了青稞及其制品中花青素含量分光光度测定方法的试样制备、分析步骤、结果计算和精 密度。 本文件适用于有色青稞、有色糌粑、有色青稞米中花青素含量的测定。 2　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3　方法原理 青稞及制品中花青素类化合物经盐酸-乙醇混合溶液提取后，在酸性条件下呈红色，于波长530 nm 下有最大吸收。在一定浓度范围内，其吸光度与提取液中花青素类化合物的含量成正比，与标准曲线比 较，可定量测定花青素类化合物的含量。 4　试剂与材料 4.1　试剂 4.1.1　盐酸（质量浓度36%~38%），分析纯。 4.1.2　无水乙醇，分析纯。 4.1.3　盐酸-乙醇溶液：取8.5 mL盐酸，750 mL无水乙醇，并用水定容至1 000 mL，现配现用。 4.1.4　检测用水应符合GB/T 6682一级水的规定。 4.2　标准品 氯化天竺葵素，（CAS号：29956-99-8）：纯度≥ 96 %，或经国家认证并授予标准物质证书的标准 物质。 4.3　标准溶液配置 4.3.1　标准储备溶液 ： 准确称取氯化天竺葵素标准品20 mg， 用盐酸-乙醇溶液定容至25 mL， 配置成800 mg/L的标准储备液，于-18℃避光保存，备用。 4.3.2　标准工作溶液：吸取一定量的标准储备溶液，用盐酸-乙醇溶液稀释成浓度为0.1 mg/L、0.2 mg/L、0.5 mg/L、1.0 mg/L、2.0 mg/L、4.0 mg/L、10.0 mg/L、30.0 mg/L的标准工作溶液。 5　仪器和设备 DB54/T 0412—2024 25.1　分析天平：感量 0.001 g。 5.2　涡旋振荡器。 5.3　紫外/可见分光光度计。 5.4　超声波萃取仪。 5.5　低温冰箱：温度为-18 ℃以下。 5.6　离心机：转速为6 000 r/min ± 50 r/min。 6　试样制备 取适量待测样品，用组织捣碎机将其粉碎成粉末状并充分混匀，用密封袋密封后放置于干燥皿中备 用。 7　分析步骤 7.1　提取 称取试样5.0 g（± 0.01 g） ，于50 mL塑料离心管中，加入22 mL盐酸-乙醇溶液，涡旋混匀后超声30 min，6 000 r/min离心5 min后过滤，将上清液转移到50 mL容量瓶中，残渣中再次加入22 mL盐酸-乙醇 溶液，重复超声、离心、过滤步骤，将上清液合并，并用盐酸-乙醇溶液定容至50 mL。取适量样品提取 液，用盐酸-乙醇溶液稀释5倍后，待测。 7.2　标准曲线测定 取系列标准溶液于比色皿中，以盐酸-乙醇混合溶液为空白，在530 nm 波长下测定吸光度。以标准 溶液浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。 7.3　样品溶液测定 将样品待测液置于比色皿中，以盐酸-乙醇溶液为空白，在530 nm 波长下测定吸光度。 8　结果计算 试样中花青素的含量以W分别按公式（1）计算。 𝑊=𝑐×V m × 5∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙∙(1.) 式中： W ——试样中花青素的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）； c ——从标准工作曲线得到的试样溶液中花青素的质量浓度，单位为毫克每升（mg/L）； V ——样液提取时 定容体积，单位为毫升（mL）； m ——试样的质量，单位为克（g）； 5——稀释倍数。 计算结果以重复性条件下获得的 2 次平行测定结果的算术平均值表示，结果保留小数点后两位。 9　精密度