中 华 人 民 共 和 国 国 家 标 准 G B 2 8 4 0 4 — 2 0 1 2 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发 布 2 0 1 2 - 0 5 - 1 7 发布 2 0 1 2 - 0 7 - 1 7 实施 食品安全国家标准 保 健 食 品 中 α - 亚 麻 酸 、 二 十 碳 五 烯 酸 、 二 十 二 碳 五 烯 酸 和 二 十 二 碳 六 烯 酸 的 测 定 G B G B G B G B 2 8 4 0 4 — 2 0 1 2 1 食品安全国家标准 保健食品中 α - 亚麻酸、二十碳五烯酸、二十二碳五烯酸 和二十二碳六烯酸的测定 1 范 围 本 标 准 规 定 了 保 健 食 品 中 α - 亚 麻 酸 、 二 十 碳 五 烯 酸 （ 简 称 E P A ， 下 同 ） 、 二 十 二 碳 五 烯 酸 （ 简 称 D P A ， 下同 ）和 二十 二碳 六烯 酸（ 简称 D H A ， 下同 ）的 气相 色谱 测定 方法 。 本 标准 适用 于保 健品 食品 中 α - 亚 麻酸 、 E P A 、 D P A 、 D H A 的 测定 ，不 适用 于以 脂肪 酸乙 酯为 有效 成 分的 保健 食品 中 α - 亚 麻酸 、 E P A 、 D P A 、 D H A 的 测定 。 2 原 理 试 样 经 酸 水 解 后 提 取 脂 肪 ， 其 中 α - 亚 麻 酸 、 二 十 碳 五 烯 酸 （ E P A ） 、 二 十 二 碳 五 烯 酸 （ D P A ） 、 二 十 二碳 六烯 酸 （ D H A ） 经 酯交 换生 成甲 酯后 ， 通 过气 相色 谱分 离检 测 ， 以 保留 时间 定性 ， 外 标法 定量 。 3 试 剂和 材料 注 ： 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为 G B / T 6 6 8 2 规定的一级水。 3 . 1 试 剂 3 . 1 . 1 氢 氧化 钾（ K O H ） 。 3 . 1 . 2 盐 酸（ H C l ） 。 3 . 1 . 3 无 水乙 醚（ C 2 H 5 O C 2 H 5 ） 。 3 . 1 . 4 乙 醇 （ C H 3 C H 2 O H ） ： 体 积分 数 ≥ 9 5 ％ 。 3 . 1 . 5 石 油醚 ：沸 程 3 0 ℃ ～ 6 0 ℃ 。 3 . 1 . 6 正 己烷 （ C H 3 ( C H 2 ) 4 C H 3 ） ： 色 谱纯 。 3 . 1 . 7 甲 醇 （ C H 3 O H ） ： 色 谱纯 。 3 . 1 . 8 无 水硫 酸钠 （ N a 2 S O 4 ） 。 3 . 2 试 剂配 制 氢 氧化 钾甲 醇溶 液 （ 0 . 5 m o l / L ） ： 称取 2 . 8 g 氢 氧化 钾， 用甲 醇溶 解并 定容 至 1 0 0 m L ， 混匀 。 3 . 3 标 准品 3 . 3 . 1 α - 亚 麻酸 甲酯 ( C 1 9 H 3 2 O 2 ) ： 纯 度 ≥ 9 9 . 0 ％ 。 3 . 3 . 2 E P A 甲 酯 ( C 2 1 H 3 2 O 2 ) ： 纯 度 ≥ 9 8 . 5 ％ 。 3 . 3 . 3 D P A 甲 酯 ( C 2 3 H 3 6 O 2 ) ： 纯 度 ≥ 9 8 . 0 ％ 。 3 . 3 . 4 D H A 甲 酯 ( C 2 3 H 3 4 O 2 ) ： 纯 度 ≥ 9 8 . 5 ％ 。 3 . 4 标 准溶 液的 配制 G B G B G B G B 2 8 4 0 4 — 2 0 1 2 2 3 . 4 . 1 单 个 脂 肪酸 甲酯 标准 储备 液 ( 4 . 0 m g / m L ) ： 称 取 1 0 0 . 0 m g α - 亚 麻酸 甲酯 、 E P A 甲 酯 、 D P A 甲 酯 、 D H A 甲 酯标 准物 质 于 2 5 . 0 m L 容 量瓶 中 ， 分 别 用 正己 烷溶 解并 定容 至刻 度 ， 摇 匀 。 此 溶液 应贮 存于 - 1 8 ℃ 冰 箱中 。 3 . 4 . 2 脂 肪酸 甲酯 混合 标准 中间 液 （ 1 . 0 m g / m L ） ： 分 别吸 取脂 肪酸 甲酯 标准 储备 液 2 . 5 0 m L 于 1 0 . 0 m L 容 量瓶 中， 摇匀 ， 亦 为标 准曲 线最 高浓 度 ， 临 用时 配制 。 3 . 4 . 3 脂 肪酸 甲酯 标准 工作 液 ： 分 别吸 取脂 肪酸 甲酯 中间 液 0 . 4 0 m L 、 0 . 8 0 m L 、 1 . 0 m L 、 2 . 0 m L 、 4 . 0 m L 于 1 0 . 0 m L 容 量瓶 中 ， 用 正己 烷定 容 ， 此 浓度 即为 0 . 0 4 0 m g / m L 、 0 . 0 8 0 m g / m L 、 0 . 1 0 m g / m L 、 0 . 2 0 m g / m L 、 0 . 4 0 m g / m L 的 标准 工作 液， 临用 时配 制。 4 仪 器与 设备 4 . 1 气 相色 谱仪 ：配 有氢 火焰 离子 化检 测器 （ F I D ） 。 4 . 2 天 平： 感量 为 1 m g 和 0 . 1 m g 。 4 . 3 旋 转蒸 发仪 。 4 . 4 离 心机 ：转 速 ≥ 4 0 0 0 r / m i n 。 4 . 5 涡 旋 混 合器 。 4 . 6 恒 温水 浴锅 。 5 分 析步 骤 5 . 1 试 样制 备 5 . 1 . 1 试 样处 理 5 . 1 . 1 . 1 固 体试 样 称 取已 粉碎 混合 均匀 的待 测试 样 0 . 5 g ～ 2 g （ 精确 到 0 . 0 0 1 g ） （ 含待 测组 分约 5 m g / g ～ 1 0 m g / g ） 加 入 5 0 m L 比 色管 中 ， 加 8 m L 水 ， 混 匀后 再加 1 0 m L 盐 酸 。 将 比 色管 放 入 7 0 ℃ ～ 8 0 ℃ 水 浴中 ， 每 隔 5 m i n ～ 1 0 m i n 以 涡 旋 混 合器 混合 一次 ，至 试样 水解 完全 为止 ，约 需 4 0 m i n ～ 5 0 m i n 。 取出 比色 管 ， 加 入 1 0 m L 乙 醇， 混合 。冷 却至 室温 后将 混合 物移 入 1 0 0 m L 具 塞量 筒中 ，以 2 5 m L 无 水乙 醚分 次洗 比 色 管， 一并 倒入 量筒 中。 密塞 振摇 1 m i n 。 加入 2 5 m L 石 油醚 ，密 塞振 摇 1 m i n ， 静置 3 0 m i n ， 分 层 ， 将 吸 出的 有 机层 过无 水硫 酸钠 （ 约 5 g ） 滤 入浓 缩瓶 中 。 再 加入 2 5 m L 无 水乙 醚密 塞振 摇 1 m i n ， 2 5 m L 石 油 醚 ， 密 塞 振 摇 1 m i n ， 静 置 、 分 层 ， 将 吸 出 的 有 机 层 经 过 无 水 硫 酸 钠 （ 约 5 g ） 滤 入 浓 缩 瓶 中 ， 按 “ 再 加入 2 5 m L 无 水乙 醚 … … ， 静 置 、 分 层 、 过 无水 硫酸 钠 ” 重 复操 作一 次 ， 将 全部 提取 液用 旋转 蒸 发 仪于 4 5 ℃ 减 压 浓 缩 近 干 。 用 正己 烷少 量多 次溶 解浓 缩物 ， 转 移至 2 5 m L 容 量瓶 并定 容 ， 摇 匀 。 按 5 . 1 . 2 步 骤甲 酯化 处 理。 5 . 1 . 1 . 2 油 类制 品 称 取混 合均 匀的 油类 制品 0 . 2 g ～ 1 g （ 精 确到 0 . 0 0 1 g ） （ 含 待测 组分 约 1 0 m g / g ～ 2 0 m g / g 。 ） 至 2 5 m L 容 量瓶 中 ， 加 入 5 m L 正 己烷 轻摇 溶解 ， 并 用正 己烷 定容 至刻 度 ， 摇 匀 。 按 5 . 1 . 2 步 骤甲 酯化 处理 ， 脂 肪酸 乙酯 型油 类制 品的 物理 鉴 别 参见 附录 A 。 5 . 1 . 2 甲 酯化 吸 取待 测液 （ 5 . 1 . 1 . 1 ， 5 . 1 . 1 . 2 ） 2 . 0 m L 至 1 0 m L 具 塞刻 度试 管中 ， 加 入 2 . 0 m L 氢 氧化 钾甲 醇溶 液 ， 立 即移 至涡 旋混 合器 上振 荡混 合 5 m i n ， 静 置 5 m i n ， 加 入 6 m L 蒸 馏水 ， 上 下振 摇 0 . 5 m i n ， 静 置分 层 后 ，吸 取下 层液 体， 弃去 后再 反复 用少 量蒸 馏水 进行 洗涤 ，并 用吸 管弃 去水 层， 直至 洗至 中性 （若 有 G B G B G B G B 2 8 4 0 4 — 2 0 1 2 3 机 相有 乳化 现象 ，以 4 0 0 0 r / m i n 离 心 1 0 m i n ） ， 吸取 正己 烷层 待上 机测 试用 。 注： 如使用塑料离心管或塑料刻度试管进行试样处理须同步进行空白对照试验。 5 . 2 气 相色 谱参 考条 件 5 . 2 . 1 色 谱柱 : 键 合交 联聚 乙二 醇固 定相 ， 柱 长 3 0 m ， 内径 0 . 3 2 m m ， 膜 厚 0 . 5 µ m 或 同等 性能 的色 谱 柱。 5 . 2 . 2 柱 温箱 温度 ： 起 始温 度 1 8 0 ℃