ICS 11.020 C 61 Ws 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 633—2018 巴贝虫检测虫种核酸鉴定法 Detection of Babesia spp.Identification of species by nucleic acid method 行业标准信息服务平台 2018-09-26发布 2019-04-01实施 中华人民共和国国家卫生健康委员会发布 WS/T633—2018 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家卫生标准委员会寄生虫病标准专业委员会提出。 本标准起草单位：中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所、复旦大学、第二军医大学。 本标准起草人：刘琴、周晓农、张仪、胡薇、陈家旭、朱淮民。 行业标准信息服务平台 WS/T6332018 巴贝虫检测 虫种核酸鉴定法 1范围 本标准规定了检测巴贝虫的虫种核酸鉴定法。 本标准适用于各级疾病预防控制机构和医疗机构对巴贝虫的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 WS/T564巴贝虫病诊断 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 巴贝虫Babesiaspp 一类寄生于人和脊椎动物红细胞内的原虫，可引起巴贝虫病（babesiosis）。感染人体的巴贝虫种 类主要有田鼠巴贝虫（Babesiamicroti)、分歧巴贝虫（B.divergens）、邓肯巴贝虫（B.duncani）和猎户 巴贝虫（B.venatorum）等（参见附录A）。 行业标准信息服务平台 4 仪器和器材 4.1高速离心机 最大相对离心力为12000×g。 4.2涡旋仪 无级调速范围为200r/min~3000r/min。 4.3PCR扩增仪 温度范围为4℃~99℃，温度精确为0.1℃，热盖为105℃。 4.4微波炉 4.5电泳仪 电压为5V~5000V，电流为1mA~500mA。 1 WS/T6332018 4.6凝胶成像系统 镜头分辨率(H×V)为1360×1024，光源为透射UV。 5试剂和材料 5.1分子生物学试剂 Taq酶、脱氧核糖核苷三磷酸（dNTPs）、分子质量指示物及核酸提取试剂盒选用商品化产品。 5.2 化学试剂 Tris-乙酸电泳缓冲液（TAE）、琼脂糖凝胶、6×加样缓冲液（参见附录B）。 5.3引物 扩增巴贝虫18S核糖体RNA（18SrRNA）基因和转录间隔区（ITS）基因的特异性引物（见附录 C)。 5.4参照材料 阳性对照为田鼠巴贝虫peabodymjr株基因组DNA。 空白对照为去离子灭菌水。 阴性对照为健康人全血基因组DNA。 6检测步骤 6.1样品 样品为临床诊断或疑似巴贝虫病病例抗凝血样品。 6. 2 虫种核酸鉴定 6.2.1 核酸提取 基因组DNA提取采用商品化全血DNA提取试剂盒（参见附录B）。 信息服务平台 6. 2. 2 18SrRNA基因扩增 见附录C。 6.2.3 ITS基因扩增 见附录C。 6.2.4结果判定 6.2.4.1电泳分析 6.2. 4. 1.1 电泳 2