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ICS 67.040 C 53 GB 中华人民共和国国家标准 GB/T5009.1942003 保健食品中免疫球蛋白IgG的测定 Determination of immunoglobulin in health foods 2004-01-01实施 2003-08-11发布 中华人民共和国卫生部 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 5009.194—2003 前言 本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。 本标准由卫生部食品卫生监督检验所负责起草。 本标准主要起草人:杨祖英、宋书锋。 1 GB/T5009.194—2003 引言 免疫球蛋白IgG,目前已作为功效成分添加于保健食品中,该成分对于增强免疫力、调节动物体的 IgG测定方法的基础上,根据我国的仪器设备条件进行改进,建立了片剂、胶囊、粉剂类型保健食品中免 疫球蛋白含量的高效液相色谱测定方法。 GB/T 5009.194—2003 保健食品中免疫球蛋白IgG的测定 1适用范围 本标准规定了保健食品中免疫球蛋白IgG的测定方法。 SZIC 本标准适用于片剂、胶囊、粉剂类型保健食品中免疫球蛋白IgG的测定。 本方法检出限:当取样量0.1g,稀释至25mL,进样量20μL时,检出浓度为0.5mg/mL。 2原理 根据高效亲和色谱的原理,在磷酸盐缓冲液条件下免疫球蛋白IgG与配基连接,在pH2.5的盐酸 甘氨酸条件下洗脱免疫球蛋白IgG。 3试剂 3.1流动相A:pH6.5,0.05mol/L磷酸盐缓冲液。 3.2流动相BpH2.5,0.05mol/L甘氨酸盐酸缓冲液 3.3IgG标准贮备液:称取IgG标准品(Sigma化学公司)0.0100g,用流动相A(3.1)溶解并定容至 10.0mL,摇匀,浓度为1.0mg/mL。 3.4IgG标准系列溶液:取IgG标准贮备液,用流动相A(3.1)稀释成含IgG0.2,0.4,0.6,0.8, 1.0mg/mL的标准系列。临用时配制。 4 仪器和设备 高效液相色谱仪具紫外检测器和梯度洗脱装置。 5分析步骤 5.1试样处理:称取0.1g(精确至0.001g)试样,用流动相A(3.1)稀释至25.0mL,摇匀,通过 0.45um微孔滤膜后进样。 5.2先用5倍柱体积的重蒸水洗柱,再用10倍柱体积的流动相A(3.1)平衡柱,进样,按洗脱程序进行 洗脱。 5.3HPLC参考条件 色谱柱:Pharmacia HI-Trap Protein G柱,l mL。 波长:280nm 进样量:20uL。 梯度洗脱表见表1。 表1 时间 流速/(mL/min) A/(%) B/(%) 梯度 0 0. 4 100 0 4.5 0. 4 100 0 6 5.5 0. 4 0 100 6 15. 0 0.4 0 100 6 15.5 0.4 100 0 6 22.0 0. 4 100 0 6 1
GB-T 5009.194-2003 保健食品中免疫球蛋白lgG的测定
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