ICS 11. 220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T 17999.2—2008 代替GB/T17999.1—1999 SPF 鸡 微生物学监测 第2部分：SPF鸡 红细胞凝集抑制试验 SPF chicken—Microbiological surveillance- Part 2: Hemagglutination inhibition test for SPF chicken 2009-05-01实施 2008-12-31发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 发布 中国国家标准化管理委员会 GB/T 17999.2—2008 前言 GB/T 17999《SPF鸡 微生物学监测》分为10个部分： 第1部分：SPF鸡 微生物学监测总则； 第2部分：SPF鸡 红细胞凝集抑制试验； 第3部分：SPF鸡 血清中和试验； 一第4部分：SPF鸡 血清平板凝集试验； 一第5部分：SPF鸡 琼脂扩散试验； 第6部分：SPF鸡 酶联免疫吸附试验； 一第7部分:SPF鸡 胚敏感试验； 第8部分：SPF鸡 鸡白痢沙门氏菌检验； 第9部分：SPF鸡 试管凝集试验； 第10部分：SPF鸡 间接免疫荧光试验。 本部分为GB/T17999的第2部分。 本部分修订参照了GB/T18936—2003《高致病性禽流感诊断技术》、SN/T1109—2002《新城疫微 量红细胞凝集抑制试验操作规程》、SN/T1182.2一2004《禽流感微量红细胞凝集抑制试验》、 NY/T551一2002《产蛋下降综合征诊断技术》、OIE《陆生动物（哺乳动物、禽鸟和蜜蜂）诊断试验和疫苗 手册》（第五版)中的有关规定。 本部分代替GB/T17999.1一1999《SPF鸡红细胞凝集抑制试验》。 本部分与GB/T17999.1—1999相比主要变化如下： 增加了规范性附录A“试剂的配制”和资料性附录B"1%鸡血红细胞悬液的制备”； 增加了对V形孔微量血凝板进行试验的结果判定； 对禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、禽腺病毒Ⅲ群（EDS）鸡毒支原体和滑液囊 支原血凝抑制抗体的判定标准进行了修改。 本部分的附录A为规范性附录，附录B为资料性附录。 本部分由中华人民共和国农业部提出。 本部分由全国动物防疫标准化技术委员会（SAC/TC181）归口。 本部分起草单位：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物卫生与流行病学中心、济南斯帕法 斯家禽有限公司。 本部分主要起草人：曲连东、刘家森、韩凌霞、邵卫星、朱果、单忠芳、姜骞、司昌德、于海波、孟庆文。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： GB/T 17999.11999。 GB/T 17999.2—2008 SPF鸡微生物学监测 第 2部分:SPF鸡 红细胞凝集抑制试验 1范围 GB/T17999的本部分规定了红细胞凝集抑制试验的技术要求。 本部分适用于对SPF鸡进行以下病原微生物的血凝抑制抗体检测：禽流感病毒（AvianInfluenza Virus），传染性支气管炎病毒（InfectiousBronchitisVirus），新城疫病毒（NewcastleDiseaseVirus），禽 腺病毒Ⅲ群（减蛋综合征病毒）（AvianAdenovirusGroupⅢ），鸡毒支原体（Mycoplasmagalliseptic- um），滑液囊支原体（Mycoplasmasynoviae）。 2原理 许多病原微生物具有凝集动物红细胞的能力，这种凝集红细胞的能力能被特异性抗体所抑制，因此 可用已知病原微生物检测相应的血凝抑制性抗体。 3试剂和器材 3.1试剂 3.1.1血凝抗原。 3.1.2阴性、阳性血清。 3.1.3被检血清。 3.1.4鸡红细胞。 3.1.50.85%氯化钠（NaCI)（见附录A)。 3.1.6阿氏液（见附录A)。 3.2器材 3.2.196孔微量血凝板（U形孔或V形孔）。 3.2.2微量移液器（量程为25μL、50μL、100μL）或可调微量移液器（量程涵盖25μL、50μL、100uL） 及吸头。 3.2.3水浴锅。 3.2.4离心机与刻度离心管。 4操作程序 4.1红细胞悬液的制备和抗原血凝效价测定 4.1.11%鸡红细胞悬液的制备 参见附录B。 4.1.2抗原血凝效价测定 4.1.2.1于96孔微量血凝板的第1孔～第12孔加人生理盐水25μL，共作2排。每排的第1孔加人 抗原25μL，用微量移液器，从第1孔第11孔对抗原作系列倍比稀释：即将第1孔的抗原与生理盐水 用移液器反复吹吸3次后，吸出25L移至第2孔，再反复吹吸3次后，吸出25L移至第3孔，依此类 推，直至第11孔。从第11孔中吸出25μL弃去，此孔抗原的最终稀释度为1：21l（即111og2）。第12 孔作为对照孔。 1